Тема 4 : Качествено определяне на белтъците по
биуретовия метод
I.
Теоретична част
Биуретовата реакция открива пептидна връзка ( C – NH ) в белтъците. В алкална
среда при взимодействие на белтъците с медните йони разтворите се оцветяват в
синьовиолетов цвят, в продуктите на пълната – белтъчна хидролиза (пептони) –
дават розово оцветяване. Положителна биуретова реакция дават вещества, които
съдържат нe помалко от 2 пептидни връзки. Биуретовата реакция се основава на
образуването на биуретов меден комплекс в резултат на свързването на Cu с
пептидна връзка , за която е характерна кетоформата, докато енолната й форма
рядко се среща в пептидите.
В алкална среда, полученият биуретов комплекс
претърпява пълна енолизация по схемата !
O OH
OH
H
2
N – CH – C – N – CH ..R
n
– COOH H
2
N – CH – C = N CH ..R
n
COOH
R
1
H R
1
Белтъците са най – разпространените биополимери в природата. Те са
високомолекулни кондензати на АК амидно свързани в определен ред, т.е. те са
полипептиди, свързани с повече от една пептидна връзка.
II.
Експериментална част
Задача.1
Да се докаже наличието на белтък в изследвана проба.Като се използва
биуретова реакция, да се определи количеството съдържание на белтък в пробата.
Опит1.
Биуретова реакция за доказване на белтък – цветна реакция за откриване на
пептидна връзка. Характерно е за всички белтъци. В алкална среда и в присъствие на
Cu
2+
белтъчните разтвори се оцветяват в синьовиолетово. Дължи се на образувалото
се комплексно съединение на Cu с пептидни групи ( CO – NH ). Биуретовата
реакция се получава и с продуктите от непълната хидролиза на белтъците – пептони
и полипептиди. Интензивността на оцветяване зависи от дължината на пептида и
варира от синьовиолетово до червено.